眾所皆知干細胞無血清培養(yǎng)基的基本配方:基本成分為基礎培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。 用于生物制藥和疫苗生產的細胞在體外培養(yǎng)時，多數呈貼壁生長或兼性貼壁生長；而當其在無血清、無蛋白培養(yǎng)基中生長時，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白，細胞往往以懸浮形式生長。

1.直接適應——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到干細胞無血清培養(yǎng)基（SFM）中。

一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應干細胞無血清培養(yǎng)基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時，傳代培養(yǎng)細胞。當細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時，細胞*適應了干細胞無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應了干細胞無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。

2.連續(xù)適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到干細胞無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應相比較，連續(xù)適應趨向對于細胞更加溫和一些。

（1）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25%SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。

（2）當細胞密度>5×10細胞/ml時，以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（3）以2×10到3×10細胞/ml細胞密度，25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。

（4）當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml（接種后4到6天），在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（5）每隔3到5天，當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml，細胞活率在90%時，貯備的適應了干細胞無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。

建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物，直到每一次細胞適應了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進行幾次傳代。

在適應過程中，不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養(yǎng)基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質，因而更易于受外界因素的影響。

細胞培養(yǎng)適應替代血清：許多細胞利用連續(xù)適應方法能很好的適應，用包含FBS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1（v∶v）的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式，連續(xù)幾代減少當前培養(yǎng)基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100%替代培養(yǎng)基。每次適應改變血清比例時，傳代細胞2到3次。

培養(yǎng)可以直接從FBS轉換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發(fā)生，4允許進行2到3次的傳代，使生長率恢復到以前的水平。

特別需要強調的是：配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質量的水，如石英玻璃蒸餾器經三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為干細胞無血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質含量甚微，也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關鍵因素之一。